microRNA原位杂交及Northern检测探针及试剂盒

  • 描述
  • 产品特点
  • 技术流程
  • 配套产品
  •        丹麦Exiqon公司致力于microRNA研究领域,为研究者提供一套完整的microRNA研究体系??党缮锾峁〦xiqon芯片技术服务的同时,亦可为您定购miRCURY LNATM系列产品,包括Knockdown探针、Northern探针、原位杂交探针和实时定量PCR系列试剂。

    miRCURY LNA? microRNA Knockdown探针
           对miRBase记录和注释的所有物种(包括脊椎动物,无脊椎动物,植物等)的microRNA,Exiqon均提供相应的LNA? microRNA Knockdown探针;探针采用了LNA?锁核酸技术,序列特异性强,有效消除二级结构和避免探针自身退火;探针的生物稳定性好,细胞毒性小,适用于各种经典的转染方法;如果选择荧光标记(fluorescein)探针,还可以直接估计转染效率。

    miRUCRY LNA Knockdown探针标记类型
    knockdown probe, ready to label
    knockdown probe, 5’ or 3’ -amino labeled
    knockdown probe, 5’ or 3’-fluorescein labeled
     * 除针对特定microRNA的knockdown探针外,还可订购以上标记类型的knockdown对照探针。
     

    miRCURY LNA? microRNA原位杂交探针    

           对miRBase记录和注释的所有物种(包括脊椎动物,无脊椎动物,植物等)的microRNA,Exiqon均提供相应的LNA? microRNA 原位杂交(in situhybridization)探针;探针采用了LNA?锁核酸技术并进行了优化,序列特异性强,有效消除二级结构和避免探针自身退火;探针灵敏度高,特异性强,可检测低丰度的microRNA;探针标记方式灵活多样,可满足研究者的不同实验需要。

           如果对实验信噪比要求特别严格,例如需检测低丰度microRNA,还可采用5’ 和 3’ double DIG-labeled miRCURY LNA? microRNA原位杂交探针,由于具有两个DIG标记,这种探针在同类产品具有最高的检测灵敏度。
     
    miRUCRY LNA原位杂交检测探针标记类型
    In situhybridization detection probe,ready to label
    In situhybridization detection probe,5’ or 3’-DIG labeled
    In situhybridization detection probe,5’ or 3’-amino labeled
    In situhybridization detection probe,5’ or 3’-biotin labeled
    In situhybridization detection probe,5’ or 3’-fluorescein labeled
    In situhybridization detection probe,3’ and 5’-DIG labeled
     * 除针对特定microRNA的原位杂交探针外,还可订购以上标记类型的原位杂交阳性、阴性对照探针。
     


    miRCURY LNA? microRNA Northern杂交探针    

           对miRBase记录和注释的所有物种(包括脊椎动物,无脊椎动物,植物等)的microRNA,Exiqon均提供相应的LNA? microRNA Northern杂交探针;探针采用了LNA?锁核酸技术并进行了优化,序列特异性强,灵敏度高,并有效消除了二级结构和探针自身退火的形成;采用LNA? microRNA Northern杂交探针,样本总RNA最低只需2.5μg。

     
    miRUCRY LNA Northern杂交检测探针标记类型
    Northern blotting detection probe,ready to label
    Northern blotting detection probe,5’ or 3’-DIG labeled
    Northern blotting detection probe,5’ or 3’-amino labeled
    Northern blotting detection probe,5’ or 3’-biotin labeled
    Northern blotting detection probe,5’ or 3’-fluorescein labeled
     * 除针对特定microRNA的Northern检测探针外,还可订购以上标记类型的Northern阳性、阴性对照探针。
     


  • miRCURYTMLNA knockdown探针的主要优点

    ? 反义抑制效率高
    ? 特异性高
    ? 细胞毒性小
    ? 与标准的细胞转染方法兼容性好
    ? 生物稳定性高

    抑制效率高
           miRCURYTMLNA knockdown探针有很强的抑制效果。标准浓度或者更低浓度的miRCURYTMLNA knockdown探针都能有效抑制miRNA(Fig.1)。
    Fig.1 miRCURY? LNA Knockdown探针对microRNA显著的抑制效果
    miR报告载体携带了miR序列的互补区,能够显示miR的表达水平。对照则是不携带miR序列互补区的空载体(pMIR-no target)。将miR-报告基因(荧光素酶),pGL4.13-Renilla(用于做标准化)和针对特定has-mir的miRCURY? LNA Knockdown探针,共同转入HeLa细胞中。用Dual-Glow? Luciferase (Promega)进行表达水平的检测。miRCURY? LNA Knockdown探针对特定has-mir的抑制作用达到了60%左右。
     
           与一些用于knockdown miRNA的标准方法相比,如普通DNA探针、基于2’-O-methyl化学修饰的探针,miRCURYTMLNA knockdown探针显示了很高的抑制效率(Fig.2)。
     
    Fig.2不同knockdown miRNA的几种方法比较
    该图显示的是pMIR-21荧光素酶报告基因与针对hsa-mir-21做knockdown不同来源的寡核苷酸探针共转的结果。ProductA和B都是普通DNA寡核苷酸探针,2’-OMe是基于2’-O-methyl化学修饰的探针,以及miRCURYTMLNA探针,NC为阴性对照探针。以上都是在MCF7细胞中共转60小时后测得的结果。
     
    特异性高
           如果探针与靶基因之间有一个碱基错配,抑制效果就会显著降低。我们的数据显示,当探针和靶基因之间有两个碱基错配时,探针的抑制效果就完全被削弱了(Fig.3)。这一点相当重要,因为在细胞中相关的miRs很可能序列极为相似,所以knockdown探针的特异性越高越好。
    Fig.3 miRCURYTMLNA knockdown探针的错配识别能力

    该图显示的是针对hsa-mir-21的完全配对knockdown探针和错配的knockdown探针的抑制能力。pMIR-21报告基因的上调倍数是不同程度的miRCURYTM LNA knockdown错配探针与对照相比得出的结果。实验所用的是Hela细胞,转染24小时后用Dual-Glow? Luciferase检测报告基因的表达水平。


    miRCURYTM  原位杂交检测探针主要优点

    ?  高灵敏度,可以检测普通oligo探针检测不到的微量miRNAs。
    ?  覆盖所有已知的miRNAs。
    ?  高特异性,能够区分单碱基或2个碱基差异的miRNAs。
    ?  适应多种标记方法,如DIG、生物素、荧光。
    ?  提供完整的实验步骤。

     


                                               

    图 1、miRNA-122a是肝细胞特异表达的,本图用miRCURYTMmiRNA-122a检测探针对小鼠肝细胞miRNA-122a(红色)进行检测。DNA(蓝色)用DAPI标记。


                                               

    图2、用miRCURYTM miRNA-124a探针检测人脑颞侧皮质的miRNA-124a的表达水平。所用的标本为甲醛固定、石蜡包埋的切片。


    A.
    B.
    图3、小鼠海马中miR-138的原位杂交实验。
    A. 分别用含有30%,10%,0%LNA的miR-138探针以及scrambled miR-138LNA探针,与小鼠海马组织在60度下原位杂交。杂交信号显示为红色, DNA(蓝色)用DAPI标记。该照片为放大5倍时的分辨率。
    B. A图白色方框区域的进一步放大,更加清晰的显示杂交信号。该照片放大倍数为25倍。
  • miRCURYTM LNA knockdown探针转染技术流程:
    1. 将培养到完全融合的细胞用胰酶消化后,计数,按1.5×106个细胞/瓶接种,加入5ml D-MEM完全培养基;
    2. 培养1-2天至40-80%融合;
    3. 将2ug miRCURYTM Knockdown 探针(或者Knockdown探针与报告质粒共转染)与8ul PLUS reagent混合,室温孵育15分钟;
    4. 将12ul Lipofectamin 与125ul DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)混合,加入孵育好的DNA-PLUS混合物,混匀;
    5. 吸掉培养皿中的培养基,用4ml DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)洗两次;
    6. 将2ml DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)加入到DNA/LipofectaminPLUS混合物中,混匀,迅速加入培养皿中,37℃、5%CO2培养箱中培养3小时;
    7.  吸掉培养基,用4ml DMEM(不含血清、含抗生素和Glutamax)洗两次,添加新鲜DMEM(含有血清、抗生素、Glutamax),37℃、5%CO2培养箱中继续培养;
    8. 培养的细胞即可用于后续生物实验。
     
    *Glutamax:L-谷氨酰胺的衍生物,较其更为稳定。
  • Exiqon公司microRNA LNA Knockdown探针产品列表:  
    Product Type Product No. Storage Temp

    miCURY LNA microRNA inhibitor

    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 1 nmol (4100001-4104908)-000 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol (4100001-4104908)-001 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 15 nmol (4100001-4104908)-002 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol, 5`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-011 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol, 3`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-021 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 1 nmol (4100001-4104908)-100 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol (4100001-4104908)-101 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 15 nmol (4100001-4104908)-102 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol, 5`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-111 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol, 3`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-121 -20℃

    miRCURY LNA inhibitor control
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 1 nmol 199006-000 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 5 nmol 199006-001 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 15 nmol 199006-002 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199006-011 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199006-021 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 1 nmol 199007-000 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 5 nmol 199007-001 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 15 nmol 199007-002 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199007-011 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199007-021 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 1 nmol 199006-100 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 5 nmol 199006-101 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 15 nmol 199006-102 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199006-111 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199006-121 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 1 nmol 199007-100 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 5 nmol 199007-101 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 15 nmol 199007-102 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199007-111 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199007-121 -20℃

    预制的miRCURYTmmicroRNA 原位杂交检测探针
           预制的检测探针覆盖了The Well Trust Sanger Institue收录的所有miRNAs,包括无脊椎动物、脊椎动物和植物等。
    Product name Product No. Storage Temp
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, ready to label 610000-689999-300 -20℃
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG labeled 610000-689999-340 -20℃
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, 5'-biotin labeled 610000-689999-370 -20℃
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein labeled 610000-689999-310 -20℃
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, 3'-DIG labeled 610000-689999-350 -20℃
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG and 3'-DIG labeled 610000-689999-360 -20℃
    miRCURY LNA?Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 3'-fluorescein labeled 610000-689999-330 -20℃
     
    定制的miRCURYTMmicroRNA 原位杂交检测探针
           定制的检测探针是Exiqon根据客户自己选择的miRNA专门定制的。   
    Product name Product No. Storage Temp
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, ready to label 699999-300 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG labeled 699999-340 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-biotin labeled 699999-370 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein labeled 699999-310 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-amino labeled 699999-390 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-TYE563 labeled 699999-330 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-TYE665 labeled 699999-360 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 3'-DIG labeled 699999-350 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 3'-biotin labeled 699999-380 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 3'-fluorescein labeled 699999-320 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG and 3'-DIG labeled 699998-341 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-biotin and 3'-biotin labeled 699998-371 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 3'-fluorescein labeled 699998-311 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 4'-fluorescein labeled 699998-391 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 5'-fluorescein labeled 699998-331 -20℃
    Custom miRCURY LNA? Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 6'-fluorescein labeled 699998-361 -20℃
     
    miRCURY LNATMmicroRNA原位杂交优, , 化试剂盒(石蜡标本)
           原位杂交优化试剂盒(石蜡标本)包含进行microRNA原位杂交, 实验的所有关键试剂。包括两端地高辛标记检测探针,原位杂交缓冲液和配套, 试剂。储存条件:探针及蛋白酶K-20℃,杂交buffer4℃。 
    Product name Product No. description
    microRNA ISH Optimization Kit 1 (FFPE) 90001 Optimization Kit 1 (miR-1), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 2 (FFPE) 90002 Optimization Kit 2 (miR-21), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 3 (FFPE) 90003 Optimization Kit 3 (miR-122), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 4 (FFPE) 90004 Optimization Kit 4 (miR-124), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 5 (FFPE) 90005 Optimization Kit 5 (miR-126), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 6 (FFPE) 90006 Optimization Kit 6 (miR-143), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 7 (FFPE) 90007 Optimization Kit 7 (miR-145), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 8 (FFPE) 90008 Optimization Kit 8 (miR-205), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 9 (FFPE) 90009 Optimization Kit 8 (miR-223), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 10 (FFPE) 90010 controls, buffer and ProtK (400 slides)