非标定量技术

  • 简介
  • 技术优势
  • 技术流程
  • 应用领域
  • 仪器平台
  • 样品要求
  •        采用稳定同位素标记定量的方法,能够精确的对蛋白表达水平进行定量分析。然而,标记定量的方法也存在某些不足之处:包括,额外的样品处理过程,昂贵的标记试剂,不完全标记导致样品复杂化,低丰度多肽难以检测,可标记样品数量有限等。作为替代,非标记定量技术(LFQ,label-free quantification)能够避免此类缺陷。LFQ定量通??刹捎昧街址绞剑海?)谱图计数法(Spectral counting),使用多肽被鉴定次数来代表对应多肽的相对含量,进而计算出对应蛋白的相对表达量;(2)母离子强度(precursor ion intensity),提取鉴定到的多肽在一级质谱(MS1)中的色谱峰面积代表其相对含量,然后计算出对应蛋白的相对表达量。和标记定量技术不同在于:标记定量样品预先混合并同时进行LC-MS/MS检测,而LFQ技术要求每个样品独立进行制备和LC-MS/MS检测,因此准确性和通量弱于标记定量技术。 

    图1. Label-free定量技术原理。


  • LFQ定量技术克服了同位素标记定量技术的诸多限制:更加灵活,适用于各种样品;更高的灵敏度,定量更多的蛋白。
    ● 特异性与灵敏度兼备:基于质谱的蛋白质组学精确到单个氨基酸位点,蛋白鉴定准确,灵敏度高,是profiling分析和PTM研究的强大工具。
    严格的质量控制:数据稳定、重现性好,定量动态范围广,多个样品平行处理,接近标记定量的定量准确性。
    专业的数据分析:标准的搜库流程,专业的统计和生信分析,出版级的图表展示,完整全面的分析报告。

  • ●疾病标志物筛选
    ●分子机制研究
    ●药物作用靶点研究
    ●特殊功能蛋白质筛选

  • Thermo Scientific EASY-nLC  1200

    Thermo Scientific Q Exactive 


  • 样品类型 样品要求
    蛋白质提取物 浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >200μg
    细胞样品 细胞量 >5×106
    组织样品 动物、微生物组织湿重  >100mg
    体液样品 血液体积 >500μl,血清、血浆、脑脊液>500μl,尿液>50ml